Micoplasma

A cultura celular é uma técnica amplamente utilizada em laboratórios de pesquisa em todo o mundo. No entanto, a contaminação de células com micoplasma é uma preocupação comum em culturas celulares, já que a presença desses microrganismos pode afetar resultados experimentais e levar a resultados irreprodutíveis. É importante testar as células de forma regular para detecta sua presença. Neste artigo, discutiremos o que é micoplasma, como ele afeta a cultura celular, a importância de testar células para contaminação, métodos de testagem, como prevenir e controlar a contaminação e tratamentos para células contaminadas.

1. O que é micoplasma e como ele afeta a cultura celular

1.1. Definição

Micoplasma são bactérias sem parede celular, sendo a menor forma de vida livre conhecida. Elas infectam diversos tipos de células, incluindo culturas de células humanas e animais, plantas e fungos. A contaminação por micoplasma é um problema comum em culturas celulares, afetando negativamente a qualidade e resultados dos experimentos.

1.2. Efeitos da contaminação de micoplasma em cultura celular

A presença de micoplasma em culturas celulares pode afetar a viabilidade, crescimento e função celular, além de alterar a expressão de genes e proteínas. Isso pode levar a resultados inconsistentes e comprometer a validade dos experimentos, causando perda de tempo e recursos. Além disso, a contaminação pode levar a possíveis riscos para a saúde humana, caso os experimentos envolvam o uso dessas células em terapias ou diagnósticos.

1.3. Como as células são contaminadas

As células podem ser contaminadas de várias maneiras, incluindo contato com outros cultivos de células infectadas, reutilização de tubos e meios de cultura contaminados e uso de equipamentos contaminados, como pipetas e incubadoras. A contaminação também pode ocorrer através de fontes externas, como meio ambiente e pessoal de laboratório.

2. A importância de testar células para contaminação por micoplasma

2.1. Por que testar células

Testar as células para micoplasma é fundamental para garantir a qualidade e integridade dos experimentos, bem como a biossegurança do pessoal envolvido com culturas celulares. A detecção precoce da contaminação permite que medidas sejam tomadas para controlar e evitar a propagação da contaminação.

2.2. Consequências de não testar as células para micoplasma

A falta de detecção de micoplasma pode levar a resultados imprecisos e inconsistentes nos experimentos. Além disso, a propagação da contaminação pode levar a perda de tempo e recursos, além de colocar em risco a saúde humana caso o produto final seja usado em terapias ou diagnósticos.

2.3. Frequência recomendada para testes

Para garantir a qualidade das culturas celulares, recomenda-se que as células sejam testadas regularmente para micoplasma. A frequência recomendada varia de acordo com o nível de risco do experimento e o uso final das células, geralmente variando de uma vez a cada 2 a 4 semanas.

3. Métodos de testagem de micoplasma em cultura celular

3.1. Métodos de cultura de célula para detecção de micoplasma

Métodos de cultura de célula consistem em semear as células em meio de cultura específico e esperar o crescimento de micoplasma no meio. Essa metodologia é simples e econômica, mas pode apresentar baixa sensibilidade e levar até 28 dias para obter resultados.

3.2. Técnicas moleculares para a detecção

Técnicas moleculares, como a amplificação do DNA por PCR, são altamente sensíveis e específicas para a detecção de micoplasma. Essa metodologia pode levar menos de 24 horas para obter resultados e é considerada a opção mais eficiente e precisa. Existem diversos artigos cientificos descrevendo como detectar micoplasma por PCR, como por exemplo este. Outras opcoes como analises por luminescencia tambem sao possiveis e existem kits comerciais para isso, como por exemplo MycoAlert da Lonza.

3.3. Procedimentos de coleta de amostras para testes de micoplasma

As amostras de cultura celular podem ser coletadas a partir do meio de cultura, células infectadas, supernatante da cultura ou uma combinação desses materiais. O melhor método depende do tipo de amostra e do método de teste escolhido. É importante seguir rigorosamente o protocolo de coleta de amostras e evitar contaminação cruzada.

4. Como prevenir e controlar a contaminação por micoplasma em cultura celular

4.1. Boas práticas para prevenir a contaminação por micoplasma

A prevenção da contaminação pode ser realizada através de boas práticas laboratoriais, incluindo uso de equipamentos estéreis, mudança frequente dos meios de cultura, utilização de culturas celulares de qualidade com certificado, e treinamento adequado do pessoal envolvido.

4.2. Como lidar com células contaminadas com micoplasma

Caso as células já estejam contaminadas, é importante interromper o uso da cultura imediatamente e descartá-la adequadamente. A contaminação pode ser tratada com o uso de antibióticos específicos para micoplasma, ou com a limpeza rigorosa dos equipamentos e do laboratório, seguida de teste rigoroso das novas culturas. É fundamental notificar todos os colaboradores envolvidos e tomar medidas preventivas para evitar futuras contaminações.

5. Tratamentos para células contaminadas por micoplasma

Quando uma cultura celular é contaminada com micoplasma, o tratamento é fundamental para evitar que a contaminação se espalhe e afete outros experimentos. Existem várias opções de tratamento disponíveis para eliminar micoplasmas das células contaminadas e garantir a integridade da cultura celular. Um exemplo de tratamento é o Plasmocin.

5.1. Agentes antimicrobianos disponíveis para o tratamento

Os agentes antimicrobianos mais utilizados para o tratamento de micoplasmas são os antibióticos, como a doxiciclina, eritromicina e ciprofloxacina. Esses antibióticos são capazes de inibir a proliferação de micoplasmas, eliminando-os gradualmente das células infectadas.

5.2. Administração de antibióticos para células contaminadas com micoplasma

Para tratar a contaminação de micoplasma em células, é necessário administrar os antibióticos de forma adequada. Isso significa que a dosagem e o tempo de exposição devem ser cuidadosamente controlados para garantir a eficácia do tratamento e minimizar a toxicidade para as células.

5.3. Estratégias para minimizar a toxicidade dos antimicrobianos em células

Os antibióticos podem ter efeitos tóxicos em células, principalmente se administrados em doses elevadas ou por períodos prolongados. Para minimizar os efeitos tóxicos dos antimicrobianos em culturas celulares, é importante ajustar as doses de acordo com as necessidades da cultura e monitorar de perto os efeitos do tratamento nas células. Além disso, é essencial garantir que apenas os antibióticos adequados para o tipo de micoplasma presente na cultura sejam utilizados.Em resumo, a contaminação por micoplasma pode ter sérios efeitos na cultura celular e em resultados experimentais. A detecção precoce e a prevenção desse tipo de contaminação são fundamentais para garantir a qualidade e a confiabilidade dos estudos em cultura celular. Esperamos que as informações apresentadas neste artigo tenham sido úteis para ajudar os pesquisadores a lidar com a contaminação por micoplasma em suas culturas celulares.

FAQ

Como os micoplasmas afetam as células em cultura?

Os micoplasmas podem interferir na viabilidade e no crescimento das células em cultura, além de alterar a expressão gênica e o metabolismo das células. Isso pode levar a resultados incorretos ou não confiáveis em experimentos.

Qual a frequência recomendada para testes de micoplasma?

Devido à rápida proliferação dos micoplasmas, é recomendado que as culturas celulares sejam testadas quanto à presença de micoplasma a cada duas semanas.

Como prevenir a contaminação por micoplasma em cultura celular?

Algumas práticas recomendadas incluem o uso de equipamentos e materiais estéreis, a desinfecção regular de superfícies de trabalho e a manipulação cuidadosa das culturas celulares.

Quais são os tratamentos disponíveis para células contaminadas por micoplasma?

Existem diversos agentes antimicrobianos disponíveis para o tratamento de células contaminadas por micoplasma, como antibióticos e agentes antifúngicos. No entanto, é importante lembrar que esses agentes podem afetar a saúde das células, e que o tratamento deve ser administrado com cuidado para minimizar efeitos colaterais.

Informacoes adicionais:

https://www.cdc.gov/pneumonia/atypical/mycoplasma/index.html

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