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Detecção de proteínas por WESTERN BLOTTING: desvendando os fundamentos da técnica

R$199,00 R$79,00

Descrição

Público-alvo:

 Estudantes da área de ciências biológicas que:

Nunca ouviram falar e não sabem do que se trata a técnica de Western blotting, mas:

  1. têm interesse ou curiosidade de saber como é desenvolvido um projeto de pesquisa na área de ciências biológicas;
  2.  querem entender o que é e como é utilizada umas das técnicas mais populares em todos os laboratórios de pesquisa do mundo.

Já utilizam a técnica, mas:

  1.  sentem a necessidade de uma melhor compreensão de seus fundamentos.
  2.  encontram problemas em resolver os problemas ou interpretar os resultados obtidos em seus experimentos.

 Público em geral que deseja ter uma noção de como é desenvolvido um projeto de pesquisa na área de ciências biológicas.

 Conteúdo: 

  • Introdução:

    • O que é Western blotting e para que serve?
  • Revisão básica sobre as proteínas

    • O que são proteínas e o que elas fazem?
    • Estrutura básica e propriedades físico-químicas
  • Revisão básica sobre a expressão de proteínas

    • Como as proteínas são produzidas nas células?
  • Western blotting na prática:

    • Lise celular e extração de proteínas
      • Métodos de ruptura de células em cultura e tecidos
      • Solubilização de proteínas: como escolher o melhor tampão
    • Quantificação de proteínas
      • Métodos de quantificação
    • Separação de proteínas por Eletroforese
      • Eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE)
      • Como escolher a concentração do gel
      • Marcadores de peso molecular
    • Transferência das proteínas para membranas
      • Tipos de membranas
      • Tipos de transferência
      • Coloração de membranas
    • Coloração de géis e membranas
    • Detecção de uma proteína específica (Immunoblotting)
      • Bloqueio de sítios inespecíficos
      • Como escolher anticorpos primários
    • Obtenção de sinal
      • Como escolher os anticorpos secundários
      • Métodos de revelação de membranas
      • Noções de densitometria
      • Importância dos controles (internos, negativos e positivos)
  • Reutilização (stripping) e armazenamento das membrana
  • MÓDULO BÔNUS (para alunos intermediários)

    • Troubleshooting:
      • Resolução de problemas: possíveis causas e como resolver
        • Exemplos: múltiplas bandas, ausência de bandas, ghost bands (bandas negativas), excesso de background, pontos brancos e escuros na revelação, efeito sorriso…

 

Aplicações em: área de pesquisa, desenvolvimento e diagnósticos em todos os campos da biologia molecular

 

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